A PCR egy olyan teszt, amelyet számos betegség diagnosztizálására alkalmaztak. A PCR módszer lehetővé teszi a baktériumok közvetlen jelenlétének kimutatását a szervezetben, különösen annak DNS-ében. A PCR-t többek között a a Lyme-kór diagnózisában. Mi a PCR technika? Mi a valós idejű PCR?

Tartalom:

  1. PCR (teszt) - mi a PCR technika?
  2. PCR (teszt) - a PCR módszer alkalmazása
  3. PCR (teszt) - Lyme-kór
  4. PCR (teszt) - eredmények. Lehetnek hamis pozitívak?
  5. PCR (teszt) - eredmények. Lehetnek hamis negatívak

PCR(polimeráz láncreakció) a genetikai és molekuláris laboratóriumokban használt elsődleges módszer. 1983-ban fejlesztette ki Kara Mullis, akit 1993-ban Nobel-díjjal tüntettek ki érte.

PCR (teszt) - mi a PCR technika?

PCR teszta DNS egy specifikus fragmensének, például Borrelia fehérjéket kódoló gének többszöri amplifikációjából áll (általában 30-40 ciklusban) a polimeráz enzim segítségével.

Ezután az amplifikált DNS-fragmentum megjelenítéséhez speciális molekuláris festékeket használnak. A PCR a specifikus DNS-fragmensek amplifikációjának köszönhetően rendkívül érzékeny módszer.

A PCR-módszerben a DNS-fragmenseket specifikus primerpárok segítségével amplifikálják a bakteriális DNS egy adott régiójához. Például a Lyme-kór diagnózisában használt PCR célrégiók fehérjéket kódoló gének, pl. 16S rDNS, recA, fla, p66, OspA.

A biológiai anyag, amelyből a vizsgálat elvégezhető:

  • vér
  • bőrmetszet a vándorló bőrpírtól
  • cerebrospinális folyadék
  • ízületi vagy porcfolyadék
  • vizelet

PCR (teszt) - a PCR módszer alkalmazása

A Lyme-borreliosis diagnózisa mellett a PCR-módszer más mikroorganizmusok vagy emberek specifikus DNS-fragmenseit is képes kimutatni. Ezért a PCR-módszert a következő esetekben is használják:

  • vírusfertőzések diagnosztizálása és monitorozása: herpeszvírusok (herpesz vírus, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovírus), HIV, hepatitis vírusok (HBV és HCV)
  • bakteriális fertőzések diagnosztizálása és monitorozása, különösen a baktériumok,amelyeket nem lehet kultúrákon keresztül azonosítani, pl. tuberkulózis
  • daganatos betegségek diagnosztizálása és monitorozása: leukémia, mellrák, vastagbélrák, tüdőrák
  • rák hajlam diagnózisa: mell- és petefészekrák (BRCA1 és BRCA2 gének), vastagbélrák (APC és CHEK2 gének)
  • genetikai betegségek diagnózisa: hemochromatosis (HFE gén), thalassemia (HBA1 és HBA2 gének), cöliákia (HLA gének)
  • apasági tesztek, amelyek kimutatják a gyermek és az apa DNS-kompatibilitását
Megéri tudni

Jelenleg számos módosítás létezik a PCR-módszeren. Például a Lyme-kór diagnosztizálásában elsősorban a beágyazott PCR (nested PCR) és a valós idejű PCR ( ) módszereit alkalmazzák. Ez utóbbi egy kvantitatív módszer, és lehetővé teszi a Borrelia DNS-másolatok pontos számának meghatározását a vizsgált biológiai anyagban

PCR (teszt) és Lyme-kór

A Lyme-kór diagnózisának alapja a szerológiai vizsgálatok. Vannak azonban olyan klinikai helyzetek, amelyek miatt ezek a tesztek álnegatívak lehetnek:

  • szerológiai ablak, azaz a fertőzés kezdeti időszaka, amelyben a szervezet még nem termel specifikus IgM és IgG antitesteket a borrelia ellen
  • immunhiányos embereknél, akik nem termelnek elegendő antitestet
  • olyan immunkomplexek jelenléte, amelyek Borrelia antigénekből és ezekre specifikus antitestekből állnak, és megakadályozzák az antitestek szerológiai módszerekkel történő kimutatását

Ha a betegnél Lyme-kór tünetei vannak, és a szerológiai vizsgálat eredménye negatív, akkor PCR-módszeren alapuló molekuláris vizsgálat végezhető.

A Borrelia spirocheták DNS-e már a fertőzés korai szakaszában kimutatható, mivel ekkor a legmagasabb a spirocheták száma a testnedvekben

A Lyme borreliosis diagnosztizálásában elsősorban szerológiai módszereket alkalmaznak, például ELISA-t, de bizonyos klinikai helyzetekben a PCR módszerrel végzett genetikai vizsgálat is hasznos.

Minél hosszabb idő telik el a fertőzéstől, annál kisebb a valószínűsége a bakteriális DNS kimutatásának. Ezért bizonyos esetekben a PCR-teszt elvégzése előtt a baktériumokat speciális táptalajokon 1-2 hétig szaporítják, majd elvégzik a tesztet.

Ezt a megközelítést Lyme Lyme-kór gyanúja és a gyűjtött agy-gerincvelői folyadék esetén alkalmazzák. A fertőzés késői szakaszában célszerűbb ELISA-tesztet végezni

A PCR módszer nem alkalmazható a Lyme-kór rutin diagnosztizálására a szabványosítás hiánya miatta Borrelia burgdorferi fajták lengyelországi előfordulásáról.

A diagnózis felállításának nehézségei esetén (különösen a betegség korai szakaszában) azonban a PCR-teszt eredménye hasznos a diagnosztikai folyamatban

A pozitív teszteredmény azt jelenti, hogy a vizsgált anyagban kimutatták a Borrelia burgdorferi DNS és változatai jelenlétét, de ez nem magyarázza meg, hogy a szervezet aktívan fertőzött-e. Másrészt a negatív eredmény nem zárja ki a baktériumok jelenlétét a szervezetben.

Egyes laboratóriumok kínálnak vizsgálatot a borrelia DNS jelenlétére a kullancsban. Egy ilyen teszt eredménye azonban nem alapja a Lyme-kór diagnózisának egy megharapott személynél.

PCR - eredmények. Lehetnek hamis pozitívak?

A PCR egy rendkívül érzékeny módszer, ugyanakkor nagyon érzékeny a szennyeződésekre. Ezért a PCR-alapú tesztelés során nagyon fontos a megfelelő belső kontroll kiválasztása a hamis pozitív eredmények kizárása érdekében

A vizsgálatokhoz szükséges megfelelő anyaggyűjtés, valamint a vizsgálatot végző diagnosztikus szakember tapasztalata és megbízhatósága szintén kulcsfontosságú

PCR - eredmények. Lehetnek hamis negatívak

Mint minden laboratóriumi vizsgálatnál, a PCR-módszernél is előfordulhatnak álnegatív eredmények. Itt kulcsfontosságú a megfelelő véralvadásgátló vérvétel, mivel ezek egy része, például a heparin, gátolhatja a PCR-reakciót.

Az antibiotikum-terápia megkezdése utáni anyaggyűjtés csökkentheti a PCR-reakció hatékonyságát és növelheti az álnegatív eredmények valószínűségét

Emlékeztetni kell arra is, hogy a Borrelia baktériumok nagyon rövid ideig élnek a vérben és a testnedvekben, mert speciális receptoroknak köszönhetően nagyon gyorsan behatolnak a szervezet „nehezen elérhető” helyeire.

Ezért, ellentétben más mikroorganizmusok diagnosztikájával, a Borrelia spirocheták száma a biológiai anyagokban csekély, néha még a PCR módszer kimutathatósági határán is. Ez téves negatív eredményt is okozhat.

Referenciák

  1. Dunaj J. et al. A PCR módszer jelentősége a Lyme borreliosis diagnosztizálásában. Tallózás Epidemiol. 2013, 67, 119–123.
  2. Kullancsok által terjesztett betegségek laboratóriumi diagnosztikája Munkacsoport ajánlásai: Országos Laboratóriumi Diagnosztikus Kamara, Országos Népegészségügyi Intézet-Országos Higiénés Intézet, Országos fertőző betegségek szaktanácsadó, Fertőző betegségek és Idegfertőzések Osztály , Białystoki Orvostudományi Egyetem, Lengyel Virológiai Társaság, Varsó, 2014.
  3. Ružić-Sabljić E. és Cerar T. Haladás a Lyme-kór molekuláris diagnosztikájában. Expert Rev Mol Diagn. 2022január 17. (1): 19-30.
  4. Valones M.A.A. et al. A polimeráz láncreakció elvei és alkalmazásai az orvosi diagnosztikai területeken: áttekintés. Braz J Microbiol. 2009. január-márc. 40 (1): 1-11.
A szerzőrőlKarolina Karabin, MD, PhD, molekuláris biológus, laboratóriumi diagnosztikus, Cambridge Diagnostics PolskaSzakmájuk szerint biológus, mikrobiológiai szakirány, laboratóriumi diagnosztikus több mint 10 éves laboratóriumi munkatapasztalattal. A Molekuláris Orvostudományi Főiskolán végzett, a Lengyel Humángenetikai Társaság tagja, a Varsói Orvostudományi Egyetem Hematológiai, Onkológiai és Belgyógyászati ​​Tanszékének Molekuláris Diagnosztikai Laboratóriumának kutatási ösztöndíjainak vezetője. A Varsói Orvostudományi Egyetem I. Orvostudományi Karán megvédte az orvostudományok doktora címet az orvosbiológia területén. Számos tudományos és népszerű tudományos munka szerzője a laboratóriumi diagnosztika, molekuláris biológia és táplálkozás területén. A laboratóriumi diagnosztika területén dolgozó szakemberként napi szinten vezeti a Cambridge Diagnostics Polska tartalmi részlegét, és együttműködik a CD Dietary Clinic táplálkozási szakértői csoportjával. Gyakorlati ismereteit a betegségek diagnosztikájáról és diétás terápiájáról osztja meg szakemberekkel konferenciákon, tréningeken, folyóiratokban és honlapokon. Különösen érdekli a modern életmód hatása a szervezetben zajló molekuláris folyamatokra.

Kategória:

Kutatás