Segítsen a webhely fejlesztésében, megosztva a cikket a barátokkal!

Az ELISA teszt számos betegséget észlel, ezért széles körben alkalmazzák az orvostudományban és egyebekben. Az ELISA-teszt azonban leginkább a Lyme-kór diagnózisáról ismert. Mi az ELISA teszt? Hogyan kell értelmezni az eredményeket? Mi a teszt ára?

Tartalom:

  1. ELISA teszt – mit mutat ki? Az ELISA használata
  2. ELISA teszt - mi a teszt?
  3. ELISA teszt és Lyme-kór – mikor kell elvégezni?
  4. ELISA teszt - ár. Mennyibe kerül egy ELISA teszt?
  5. ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis pozitívak?
  6. ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis negatívak?

ELISA teszt , azaz az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat, egy gyakran használt laboratóriumi módszer, amely többek között a vérben lévő antitestek mennyiségi kimutatására

Ennek köszönhetőenELISA teszttaláltalkalmazása bakteriális betegségek diagnosztikájában, mint példáulLyme-kór Lyme-mal.

Az ELISA módszer előnye az egyszerűség, a gyors végrehajtás és a nagy érzékenység. Az ELISA módszert speciális, pl. Borrelia fehérjékkel (antigénekkel) és specifikus monoklonális antitestekkel töltött üregekkel ellátott műanyag lemezeken hajtják végre, amelyek célja az antitestek kimutatása a páciens mintájában.

ELISA teszt – mit mutat ki? Az ELISA használata

Az ELISA módszer nagy érzékenysége és egyszerűsége számos betegség diagnosztizálásában tette alkalmazhatóvá, de leginkább a Lyme-kór diagnosztikai módszereként ismert.

A Lyme borreliosis diagnosztikájában az ún indirekt ELISA, amely lehetővé teszi a specifikus IgM vagy IgG kimutatását a vizsgált anyagban. Ugyanígy az antitestek is kimutathatók diagnosztikai célokra:

  • vírusfertőzések: herpesz vírusok (herpesz, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovírus), HIV, hepatitis vírusok (HBV és HCV)
  • protozoonfertőzések: toxoplazmózis, giardiasis
  • autoimmun betegségek: cöliákia (anti-tTG vagy anti-DPG antitestek), Hashimoto-kór (anti-TG és anti-TPO antitestek), gyulladásos bélbetegségek (anti-ASCA és anti-ANCA antitestek)
  • parazita betegségek és allergiák,amelyben specifikus IgE antitesteket mutatnak ki. Megnövekedett szintjük allergia jelenlétére utalhat, pl. pollenre és élelmiszerekre, vagy parazita inváziókra (fegyveres galandféreg, emberi orsóféreg)

Az ELISA módszert (ún. szendvics ELISA) is módosították, amelyek lehetővé teszik az ellenanyagokon kívüli fehérjék vizsgált mintájának kimutatását. Ekkor a kutatás célja az alábbiak kimutatása a biológiai anyagban:

  • vírusok vagy baktériumok töredékei, ezek leggyakrabban egy adott kórokozóra specifikus antigének
  • szérumhormonok, pl. ösztrogén, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
  • enzimek, például kalprotektin, hasnyálmirigy elasztáz, alkalikus foszfatáz
  • tumormarkerek, pl. CA-125
  • gyógyszerek jelenléte a szérumban

Ezt a módszert az élelmiszeriparban is alkalmazzák, ahol nyomokban kimutathatók allergének (pl. tej, földimogyoró), GMO-k vagy toxinok az élelmiszerekben.

ELISA teszt - mi ez a teszt?

Például a Lyme borreliosis ELISA módszerrel történő diagnosztizálása abból áll, hogy biológiai anyagokban kimutatják az immunfehérjéket - olyan antitesteket, amelyek a Borrelia antigénekkel szembeni válasz során keletkeznek.

Az antitesteket két osztályban, az IgM-ben és az IgG-ben tesztelik. Az IgM-ek az első antitestek, amelyek baktériumokkal érintkezve jelennek meg a szervezetben, és idővel csökkennek.

Helyüket a tartósabb IgG antitestek veszik át, amelyek több tucat évig is a szervezetben maradhatnak.

Ily módon a baktériumok szervezetben való jelenlétét közvetetten vizsgálják a kifejezetten Borrelia spirochetes ellen irányuló antitestek kimutatásával.

A fertőzés különböző szakaszaiban lévő antitestek különféle Borrelia fehérjék ellen irányulhatnak. Például korai szakaszban ez a p41 fehérje.

A későbbi szakaszokban egyre több fehérje kezd megjelenni, például p21, p30, p39, p43. Ez az oka annak, hogy a Lyme-kór diagnózisa rendkívül nehéz.

A bakteriális fehérjék kiválasztása rendkívül fontos ahhoz, hogy a teszt magas diagnosztikai értéket lehessen elérni. Ezért a Lyme-kór diagnosztikájában rutinszerűen II-generációs vagy III-generációs ELISA-teszteket kell alkalmazni, amelyek során a fehérjekészleteket úgy választják ki, hogy a legmegbízhatóbb eredményt kapják.

ELISA teszt és Lyme-kór. Mikor kell fellépni?

A Lyme borreliosis a Borrelia burgdorferi baktérium és számos fajtája által okozott bakteriális betegség.

A betegség diagnosztizálása nem könnyű a Borrelia elleni immunválasz összetettsége és a laboratóriumi módszerek tökéletlensége miatt

A legszélesebb körben használt laboratóriumi módszer a rendkívül érzékeny ELISA módszer, amely kimutatja a bakteriális fehérjék ellen termelődő specifikus antitesteket.

A Lyme borreliosis diagnosztizálásában közvetett ELISA módszert alkalmaznak, amelyben a következő szakaszokat különböztetjük meg:

  • a lemez üregeinek inkubálása a pácienstől gyűjtött anyaggal, például szérummal. Ha a vizsgált anyagban borrelia elleni antitestek vannak, akkor azok a reakcióüreg alján lévő fehérjékhez kötődnek
  • majd a felesleges szérumot speciális mosófolyadékkal (pufferrel) kiöblítjük és az ún. konjugátum, azaz egy enzimhez kapcsolt antitest, amely a reakcióüregekben korábban kapcsolt antitestekhez kötődik
  • A konjugátum szubsztrátja később kerül hozzáadásra, és nincs (pozitív) vagy nincs színreakció (negatív)
  • az utolsó lépés az olvasó (spektrofotométer) által a Borrelia elleni antitestek koncentrációjának leolvasása a páciens szérumában

A Lyme-kór ELISA-módszerét vérrel, neurológiai tünetek (neuroborreliosis) esetén a liquorral is végezzük

Az ízületi folyadékot nem szabad megvizsgálni, mivel nagy a valószínűsége a hamis pozitív eredményeknek.

A betegség diagnózisának alapja az erre utaló klinikai tünetek, amelyeket laboratóriumi vizsgálatok eredményei is megerősítenek

A tünetek jelenléte nélküli laboratóriumi vizsgálati eredmény hozzáadása nem teszi lehetővé a Lyme-kór diagnosztizálását, mivel kimutatták, hogy a Borrelia spirocheták elleni antitestek egészséges emberekben is kimutathatók

A Lyme borreliosis szerológiai diagnózisa egy félkvantitatív ELISA szűrővizsgálattal kezdődik. Ha az eredmény negatív, az azt jelenti, hogy nem észleltek Borrelia spirocétát, vagy az eredmény hamis negatív.

Ha az eredmény pozitív vagy gyengén pozitív (kétértelmű), megerősítő Western blot teszt, amely nagyon specifikus

Ez megerősíti az ELISA módszerrel kapott eredmények "igazságát". A diagnosztika során nem hagyhatja ki a fenti lépések egyikét sem, és például Western blot módszerrel diagnosztikát végezhet, vagy csak ELISA módszerrel végezhet pozitív eredmény alapján diagnózist.

Lengyelországban a Lyme-kór diagnózisa nagyon gyakran az első szűrési szakaszban véget ér, ami a pozitív vagy gyengén pozitív eredmények félreértelmezését okozza.

Megéri tudni

ELISA teszt - ár. Mennyibe kerül egy ELISA teszt?

A teszt ára körülbelül 60zloty, és azonnal elkészül. Azonban körülbelül három hónapot várhat az áttétel eredményére.

ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis pozitívak?

Hamis pozitív eredmények az IgM antitestek más fehérjékkel való keresztreaktivitásából erednek. A szervezet által termelt antitestek „helytelenül” más mikroorganizmusok antigénjét Borrelia antigénként ismerhetik fel.

A leggyakoribb "hibák" a treponema pallidum-mal, herpeszvírussal fertőzötteknél, valamint szisztémás lupus erythematosusban és más reumás betegségekben szenvedőknél fordulnak elő.

ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis negatívak?

Hamis negatív eredmények jelenhetnek meg a fertőzés korai szakaszában, majd a tesztet körülbelül 3-4 hét múlva meg kell ismételni. Ezt nevezik szerológiai ablak, azaz a fertőzés kezdeti periódusa, amelyben a szervezet még nem „tudott” specifikus antitesteket termelni.

Hasonlóképpen az immunhiányos embereknél, akik nem termelnek elegendő antitestet

Nagy probléma, főleg nagyon intenzív fertőzéseknél, hogy megjelenik az ún. immunkomplexek, amelyek Borrelia spirochetes antigénekből és ezekre specifikus antitestekből állnak.

Ez "láthatatlanná" teszi az antitesteket az általánosan használt módszerek, például az ELISA számára, és bár jelen vannak a vizsgált anyagban, nem mutathatók ki.

Ilyen esetekben a laboratórium alkalmazhat immunkomplexek lebontását. Ezt a kezelést az antitestek felszabadítására tervezték. Ezt a módszert azonban nem használják széles körben a laboratóriumi szabványosítás hiánya miatt.

Megéri tudni

Miért nem könnyű a Lyme-kór diagnózisa?

Ennek oka a Borrelia elleni immunválasz összetettsége és a laboratóriumi módszerek korlátai. A fajták sokfélesége és az új, fertőzést okozó fertőzések megjelenése, különösen az európai kontinensen, nem segíti elő a hatékony diagnosztikai módszerek kidolgozását

Az utóbbi időben több fajta is megjelent Európában, mint például a Borrelia bissetii, a Borrelia valaisiana és a Borrelia spielmanii. Ezenkívül a borrelia spirocheták a szervezetben cisztákká alakulhatnak, vagy olyan helyeken maradhatnak, amelyek az immunrendszer sejtjei számára hozzáférhetetlenek.

Így "láthatatlan" az immunrendszer számára. Ezenkívül kimutatták, hogy a szövetek olyan baktériumtöredékeket tartalmazhatnak, amelyek erősen gyulladásgátló tulajdonságokkal rendelkeznek. Úgy gondolják, hogy ők felelősek a Lyme-kór krónikus tüneteiért, a vizsgálat negatív eredményei ellenérelaboratórium.

Referenciák

1. Witecka-Knysz E. és munkatársai Lyme-kór: miért olyan nehéz a diagnózis? Laboratóriumi diagnosztikus 2007. április.2. Moore A. és munkatársai: Jelenlegi irányelvek, gyakori klinikai buktatók és jövőbeli útmutatások a Lyme-kór laboratóriumi diagnosztizálásához, Egyesült Államok. Emerg Infect Dis. 2016. július 22. (7) .3. Kullancsok által terjesztett betegségek laboratóriumi diagnosztikája A Munkacsoport ajánlásai: Országos Laboratóriumi Diagnosztikus Kamara, Országos Népegészségügyi Intézet-Országos Higiénés Intézet, Országos fertőző betegségek szaktanácsadó, Fertőző betegségek és Idegfertőzések Tanszék, Orvostudományi Egyetem Białystok, Lengyel Virológiai Társaság, Varsó 2014. Hosseini S. i co: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) A-tól Z-ig. Springer 2022.

A szerzőrőlKarolina Karabin, MD, PhD, molekuláris biológus, laboratóriumi diagnosztikus, Cambridge Diagnostics PolskaSzakmájuk szerint biológus, mikrobiológiai szakirány, laboratóriumi diagnosztikus több mint 10 éves laboratóriumi munkatapasztalattal. A Molekuláris Orvostudományi Főiskolán végzett, a Lengyel Humángenetikai Társaság tagja, a Varsói Orvostudományi Egyetem Hematológiai, Onkológiai és Belgyógyászati ​​Tanszékének Molekuláris Diagnosztikai Laboratóriumának kutatási ösztöndíjainak vezetője. A Varsói Orvostudományi Egyetem I. Orvostudományi Karán megvédte az orvostudományok doktora címet az orvosbiológia területén. Számos tudományos és népszerű tudományos munka szerzője a laboratóriumi diagnosztika, molekuláris biológia és táplálkozás területén. A laboratóriumi diagnosztika területén dolgozó szakemberként napi szinten vezeti a Cambridge Diagnostics Polska tartalmi részlegét, és együttműködik a CD Dietary Clinic táplálkozási szakértői csoportjával. Gyakorlati ismereteit a betegségek diagnosztikájáról és diétás terápiájáról osztja meg szakemberekkel konferenciákon, tréningeken, folyóiratokban és honlapokon. Különösen érdekli a modern életmód hatása a szervezetben zajló molekuláris folyamatokra.

Segítsen a webhely fejlesztésében, megosztva a cikket a barátokkal!

Kategória:

Kutatás